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| | Nachweis | Kein Nachweis verfügbar |
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| Spätzle-Toll-Signalweg; Cystin-Knoten; Prodomäne; Proteinfaltung | |
| Spätzle-Toll signal pathway; cystine knot; prodomain; protein folding | |
| Die vorliegende Arbeit beschreibt die proteolytische Reifung der Isoformen Spätzle11.9 und Spätzle8.19 durch die Serinprotease Easter. Es wurden die dimere Cystin-Knoten-Domäne (CK) sowie die Prodomäne von Spätzle11.7 isoliert und diese biophysikalisch charakterisiert. Dabei konnte die 11.7Prodomäne als in Isolation intrinsisch unstrukturiert klassifiziert werden. Durch nicht-kovalente Assoziation an die reife Cystin-Knoten-Domäne ist die 11.7Prodomäne in der Lage eine kooperativ stabilisierte Struktur einzunehmen. Rezeptorbindungsstudien mit dem proteolytisch gereiften Liganden zeigten dass der putative Signalkomplex aus zwei Molekülen der Cystin-Knoten-Domäne und zwei Toll-Rezeptor-Molekülen besteht. Durch Generierung eines halbseitig gereiften Liganden konnte weiterhin ein asymmetrischer Bindungsmodus der Cystin-Knoten-Domäne an den Toll-Rezeptor nachgewiesen werden wobei ein CK-Protomer die Rezeptorbindung und das zweite Protomer die Dimerisierung des Signalkomplexes vermittelt. Weiterhin wurde eine mögliche Beteiligung der Spätzle-Prodomäne in einem ternären Komplex mit der Cystin-Knoten-Domäne und dem Toll-Rezeptor beschrieben. | |
| This thesis describes the proteolytic maturation of the isoforms Spätzle11.7 and Spätzle8.19 using the serine proteinase Easter. The dimeric cystine knot domain (CK) as well as the prodomain of Spätzle11.7 have been purified and characterized biophysically. The 11.7prodomain has been classified as intrinsically unstructured in isolation. Non-covalent association with the cystine knot domain leads to the formation of a cooperative stabilized structure of the 11.7prodomain. Receptor binding studies using the proteolytic matured ligand showed that the putative signalling complex is composed of two molecules of the cystine knot domain and two molecules of the Toll receptor. Generation of an ligand consisting of a half-cleaved Spätzle molecule suggested an asymmetric binding mode of the cystine knot domain to the Toll receptor. One CK-protomer leads to receptor binding whereas the second protomer induces the dimerization of the signal complex. In addition a possible involvement of the Spätzle prodomain within a ternary signal complex is described. |
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