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| | Nachweis | Kein Nachweis verfügbar |
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| GPCR; E. coli; in vitro Faltung; Rekonstitution; NMR-Spektroskopie | |
| GPCR; E. coli; in vitro folding; reconstitution; NMR spectroscopy | |
| G-Protein gekoppelte Rezeptoren (GPCRs) sind essentiell in einer Vielzahl von Signal-übertragungswegen und repräsentieren daher ein lohnendes Ziel für pharmazeutische Studien. Für strukturbasierte Medikamentenentwicklung sind Daten zur Struktur und Dynamik von GPCRs wie sie die NMR-Spektroskopie liefern kann Grundvoraussetzung. In dieser Arbeit wurden Protokolle zur prokaryotischen Expression zur Reinigung zur in vitro Faltung und zur Rekonstitution des Klasse A G-Protein gekoppelten Y-Rezeptors Typ 2 entwickelt mit der Rezeptorproben in einer Qualität und Quantität hergestellt werden können die Untersuchungen mittels der NMR-Spektroskopie ermöglichen. In der Expression wurden Ausbeuten von >15 mg hochreinen 15N-markierten Rezeptoren/Liter Medium erreicht. Nach Reinigung und Faltung des GPCRs in einer Detergensumgebung konnte eine Liganden-affinität von 1 9 nM gezeigt werden. Die Stabilisierung der nativen Struktur in hoher Konzentration erfolgte in Phospholipidmembranen. |
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