![]() |
| Das Dokument ist frei verfügbar. |
|
| | Nachweis | Kein Nachweis verfügbar |
|
| PK MYT1 Protein human; Myt1 Kinase; Wee1 Kinase; CDC2 Proteinkinase; Fluoreszenzpolarisation; Kapillarelektrophorese; Fluorezenzpolarisations Immunoassay; ELISA; hMyt1 Expression; Escherichia coli | |
| PK Myt1 protein human; Myt1 kinase; Wee1 kinase; CDC2 protein kinase; Fluorescence polarization; Capillary electrophoresis; Fluorescence polarization immunoassay; ELISA; hMyt1 expression; Escherichia coli | |
| In der vorliegenden Arbeit erfolgte die Entwicklung zweier Testsysteme zur Aktivitätsbestimmung der beiden Wee Kinasen Myt1 und Wee1. Methode 1 basiert auf einer Trennung von Substrat und Produkt mittels Kapillarelektrophorese (CE) und anschließender Fluoreszenzdetektion. Die zweite Methode wird durch einen Fluoreszenzpolarisations (FP) Immunoassay gebildet. Als Substrat der Kinasen wurden synthetische CDC2-abgewandelte un- / phosphorylierte Peptide eingesetzt. Für die CE Methode erfolgte eine Markierung der Peptide mit dem Fluoreszenzmarker 4-Fluoro-7-sulfamoylbenzofurazan für die FP Methode mit Fluorescein-5-maleimid. Ein weiterer Aspekt dieser Arbeit lag im biotechnologischen und biochemischen Bereich der sowohl Upstream- als auch Downstream-Prozesse einschließt. Für eine Expression der Myt1 Kinase in E. coli wurden verschiedene Expressionsstämme und Vektoren eingesetzt. Die Aktivitätsbestimmung der gewonnenen Enzymlösungen erfolgte mit den entwickelten Methoden. Neben Enzympräparationen aus bakteriellen Expressionen wurden auch Myt1- und Wee1-Präparationen aus Insektenzellen getestet. |
|
|