In unseren Untersuchungen betrachteten wir unterschiedliche Aspekte des Einflusses freier Fettsäuren (FFA) und Öle auf HaCaT-Keratinozyten. Wir führten Versuche zur Aufnahme von FFA, Membranpermeabilisierung, zum Einfluß auf die Konzentration intrazellulären freien Calciums und zur Induktion von Apoptose durch. Die Aufnahmestudien wurden unter Verwendung von Parinarsäure (PA) an einzelnen Zellen mit einem Laser Scanning Mikroskop (LSM) durchgeführt. PA wurde innerhalb weniger Minuten in die Zellmembran aufgenommen und auf intrazelluläre Membransysteme weiterverteilt. Ungesättigte FFA führten zu Permeabilisierung der Zellmembran. Diese wurde gemessen, indem die Zellen mit Cell Tracker Orange (Farbstoff auf Fluoreszeinbasis) angefärbt wurden und dem Außenmedium 6-Carboxyfluorescein (6-CF) zugesetzt wurde. Wurde die Membran durch die Applikation ungesättigter FFA gestört, konnte 6-CF in die Zelle eindringen, es kam zur lokalen Mischung von 6-CF und Cell Tracker Orange. Bei Anregung des 6-CF führte dessen Emission zur Anregung des Fluoreszeins und es konnte erstmalig eine Emission >540nm gemessen werden. Im weiteren Verlauf kam es auch zu lokalen Membranrupturen, sichtbar als Auslaufen des Zytoplasmas. Änderungen von intrazellulären Konzentrationen freien Calciums wurden mit dem LSM unter Verwendung von Fluoreszenzfarbstoffen gemessen. Wir beobachteten, daß die Inkubation mit ungesättigten FFA einen Anstieg der intrazellulären Konzentration freien Calciums nach sich zieht, der von der Konzentration der FFA abhängig ist. Gesättigte FFA, ein physiologisches Gemisch von FFA und Öle bewirkten allenfalls eine geringe und nicht signifikante Steigerung der intrazellulären Calciumkonzentration. Messungen zur Apoptoseinduktion wurden mittels Annexin V- FITC-Bindung und Kernpyknosebestimmung durchgeführt. Ungesättigte FFA, aber weder gesättigte FFA, ein physiologisches Gemisch von FFA oder Öle, induzierten eine Apoptose der Keratinozyten in Abhängigkeit von der Konzentration der FFA.
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