Die Resistenz von Ralstonia metallidurans CH34 gegenüber den Schwermetall-Kationen Co 2+ , Zn 2+ und Cd 2+ wird durch die czc-Determinante vermittelt, die auf dem Megaplasmid pMOL30 liegt. Die Strukturgen-Region der Determinante kodiert für den chemiosmotisch getriebenen CzcCBA-Efflux-Komplex. In dieser Arbeit wird die Lokalisation der Komponenten und die Struktur des Membranprotein-Komplexes näher charakterisiert. Nach Zellfraktionierung befinden sich CzcC und CzcB hauptsächlich in der Membran-Fraktion, nach Trennung der Membranen in äußere und innere Membran im Saccharose-Dichtegradienten werden sie in Fraktionen höherer Dichte angereichert. Um die Lokalisation und Topologie der Komponenten detaillierter studieren zu können, wurden Reporterplasmide für die Konstruktion von Translationsfusionen entwickelt, deren Funktion mit Kontrollfusionen getestet wurde, die für Hybridproteine bekannter Lokalisation kodierten. Große Teile von CzcC sind im Periplasma lokalisiert. Dies belegen die Aktivitäten von CzcC'-'PhoA-Fusionen. Auch CzcB erstreckt sich über den periplasmatischen Raum. Dafür sprechen die Aktivitäten von CzcB'-'PhoA-Hybridproteinen. Für die Membran-Topologie des polytopischen Transporters der inneren Membran CzcA wird ein Modell mit zwölf transmembranen Segmenten und zwei großen periplasmatischen Domänen vorgeschlagen, das auf den Aktivitäten von 25 CzcA'-'PhoA-Fusionen und Computervorhersagen beruht. Nach Blue Native PAGE kann neben den einzelnen Untereinheiten CzcB und CzcA ein für beide Proteine spezifisches Signal bei ca. 550 kDa mit Antikörpern identifiziert werden. Schließlich kann durch In vivo-Crosslinking mit Formaldehyd ein CzcB-Komplex von ca. 220 kDa Größe stabilisiert werden. Der Komplex wurde gereinigt und durch Erhitzen auf 96 °C in seine Bestandteile zerlegt.
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